乾貨分享 | 實驗室常用細胞的生長特性及對應的培養基種類

生科雲選 發佈 2022-09-26T13:50:32.271374+00:00

注釋:CHO-K1由CHO衍生而來,CHO是T. T. Puck 在1957年從一隻成年中國倉鼠卵巢獲得的。培養液:Ham's F12K , 10% 胎牛血清。

CHO-K1細胞

CHO-K1細胞是實驗中非常常用的一個細胞株,在生物製藥中使用也非常廣泛。該細胞株培養條件簡單,貼壁強度適中,比較容易轉染,很適合用它來研究一般哺乳動物基因的功能。

來源:Cricetulus griseus (中國倉鼠) 卵巢

形態:表皮細胞

生長特性:貼壁

注釋:CHO-K1由CHO衍生而來,CHO是T. T. Puck 在1957年從一隻成年中國倉鼠卵巢獲得的。

培養液:Ham's F12K (含2 mM L-穀氨醯胺,1.5 g/L NaHCO3), 10% 胎牛血清。

傳代:吸去培養液。用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清會抑制胰酶的活性)。加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培養箱內約5分鐘,直到細胞全部脫落。加6-8毫升培養液,用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養器皿中。(以1:4到1:8為宜,傳代期間培養液更換1-2次)

凍存:95%培養液+5%DMSO凍存於液氮。


293細胞

293細胞比較容易轉染,是一個很常用的表達研究外源基因的細胞株。293細胞的一個衍生株:293T/17的轉染效率更高,成為廣大研究者研究基因功能的一個強大工具。

293細胞的缺陷是生長過程中貼壁強度比較小。所以在實驗過程中容易流失,從而影響實驗結果。如果一個實驗室新得到的293細胞是郵寄得到的並且細胞在培養瓶中,就需要讓細胞沉降幾天時間,因為大量細胞會漂浮在培養液里。

來源:人體腎臟

形態:上皮細胞

生長特性:貼壁

注釋:該細胞含腺病毒5 DNA 。

培養液: MEM(含 2 mM L-穀氨醯胺和 Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需胺基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉), 10% 馬血清(熱滅活)

傳代: 吸去培養液。用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清會抑制胰酶的活性)。加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培養箱內約5分鐘,直到細胞全部脫落。加6-8毫升培養液,用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養器皿中。(以1:2到1:4為宜,傳代期間培養液2-3天更換1次)

凍存:95%培養液+5%DMSO凍存於液氮。


vero細胞

Vero細胞被成功的用來培養狂犬病疫苗、乙腦疫苗等多種疫苗,在非典期間又為研究冠狀病毒做出貢獻,在醫藥研究種廣泛應用。

來源: 非洲綠猴腎細胞

形態:上皮細胞

生長特性:貼壁

注釋:該細胞是日本千葉大學的Y. Yasumura和Y. Kawakita於1962年3月27日從一隻正常的成年非洲綠猴腎組織培養出來的。

培養液:MEM( 含 2 mM L-穀氨醯胺和 Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需胺基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉), 10%胎牛血清

傳代:吸去培養液。用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清會抑制胰酶的活性)。加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培養箱內約5分鐘,直到細胞全部脫落。加6-8毫升培養液,用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養器皿中。(以1:3至1:6為宜,傳代期間培養液每周更換2-3次)

凍存: 95%培養液+5%DMSO凍存於液氮。


NIH-3T3細胞

NIH-3T3細胞在實驗室常用來做轉染及基因表達的研究。易感病毒有鼠肉瘤病毒和鼠白血病毒。

來源: Mus musculus(小家鼠)胚胎

形態:成纖維細胞樣

生長特性:貼壁

注釋:為得到適合轉染得細胞株,NIH-3T3細胞至少連續克隆過5次。NIH-3T3細胞容易轉染DNA,鼠痘病毒陰性。

培養液:DMEM(含4mM L-穀氨醯胺、4.5g/L葡萄糖、1.5g/L碳酸氫鈉),10%小牛血清

傳代:吸去培養液。(不要讓細胞長滿培養器皿,長滿80%為宜)用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清會抑制胰酶的活性)。加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培養箱內約5分鐘,直到細胞全部脫落。加6-8毫升培養液,用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養器皿中。(以3-5x103/cm2為宜,傳代期間培養液每周更換2次)

凍存: 95%培養液+5%DMSO凍存於液氮。


PC-12細胞

PC-12細胞是一個常用的神經細胞株。

來源: Rattus norvegicus (褐家鼠) 腎上腺嗜鉻細胞瘤(一種交感神經系統的腫瘤)

形態:多角型細胞

生長特性:貼壁較松,容易成團

注釋:PC-12細胞株來源於一種可移植的鼠嗜鉻細胞瘤,該細胞對神經生長因子(NGF)有可逆的神經元顯形反應,該細胞不合成腎上腺素。

培養液:Ham's F12K(含2 mM L-穀氨醯胺,1.5 g/L NaHCO3)+15%馬血清+2.5% 胎牛血清。

傳代:吸去培養液。加入新的培養液,用吸管吹下細胞或用手拍打培養瓶或刮下細胞到培養液中,用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養器皿中。(以1:4為宜,傳代期間2-3天更換培養液)

凍存:95%培養液+5%DMSO凍存於液氮。


Hela細胞

Hela細胞是在所有細胞株中最著名的。它來源於美國的Helen Lane,她1951年死於子宮頸癌。但源自她的腫瘤的細胞卻在世界各地的實驗室中得到廣泛的使用。

來源:人宮頸癌

形態:上皮細胞

生長特性:貼壁

注釋:Hela細胞顯角蛋白免疫沉澱染色陽性,包含HPV-18序列,有正常水平的pRB和p53的低水平表達。

培養液:MEM(含 2 mM L-穀氨醯胺和 Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需胺基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉), 10%胎牛血清

傳代:吸去培養液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清會抑制胰酶活性)。加2-3毫升Trypein-EDTA,放37℃培養箱內約5分鐘,直到細胞全部脫落。加6-8毫升培養液,用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養器皿中。(以1:2到1:6為宜,每周傳代2-3次)

凍存:95%培養液+5%DMSO凍存於液氮。


BHK21細胞

BHK細胞是指幼年敘利亞地鼠腎細胞(BabyHamster Syrian Kidney),1961年建株。原始的細胞株是成纖維細胞,貼壁依賴性。1963年獲得單細胞克隆細胞。後經無數次傳代後細胞可懸浮生長,它廣泛用於增殖各種病毒,生產獸用疫苗。最常用的是BHK21的一個亞克隆細胞,即克隆13或C13 。

來源:敘利亞倉鼠腎細胞

形態:纖維原細胞

生長特性:貼壁

注釋:這個細胞來自於一隻出生一天的新生倉鼠,隨後被改造成一個易於作表達的宿主細胞株。

培養液:MEM(含 2 mM L-穀氨醯胺和 Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需胺基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉)+ 10%胎牛血清

傳代:吸去培養液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.03 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清會抑制胰酶活性)。加2-3毫升Trypein-EDTA,放37℃培養箱內約5分鐘,直到細胞全部脫落。加6-8毫升培養液,用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養器皿中。(以1:2到1:10為宜,每周傳代1-2次)

凍存:95%培養液+5%DMSO凍存於液氮。


HepG2細胞

Hep G2細胞來源於一個15歲白人的肝癌組織。該細胞分泌多種血漿蛋白:清蛋白、α2-巨球蛋白、血纖維蛋白溶酶原、鐵傳遞蛋白等。該細胞能大容量培養,B肝表面抗原陰性,對G418有抗性,對人生長激素有刺激反應。

來源:人肝癌細胞

形態:上皮細胞

生長特性:貼壁

注釋:該細胞表達3-羥基-3-甲基戊二酸輔酶A還原酶和肝甘油三酸脂脂肪酶。該細胞在有百草枯(英文名:gramoxone)的環境下過氧化氫酶mRNA表達增加,ApoA-I mRNA 表達減少。

培養液:MEM(含 2 mM L-穀氨醯胺和 Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需胺基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉)+ 10%胎牛血清。

傳代:吸去培養液。用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清會抑制胰酶的活性)。加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培養箱內約5分鐘,直到細胞全部脫落。加6-8毫升培養液,用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養器皿中。(以1:4至1:6為宜,傳代期間培養液每周更換2次)

凍存: 95%培養液+5%DMSO凍存於液氮。


Sf9細胞

Sf9細胞常在Baculovirus(杆狀病毒)表達系統中用作宿主細胞,來表達外源蛋白。

來源: Spodoptera frugiperda(草地夜蛾)卵巢細胞

形態:上皮細胞

生長特性:貼壁

注釋:Sf-9細胞是由G.E. Smith 和 C.L. Cherry 在1983年從細胞株IPLB-SF 21 AE得來的一個克隆。IPLB-SF 21 AE是1977年由Vaughn等從草地夜蛾蛹的卵巢組織得到的。

培養液:TNM-FH培養液,照說明配好Grace's Antheraea 培養液,每升培養液加3.3g酵母粉和3.3g乳白蛋白水解物,用1M KOH調pH到6.2-6.4過濾除菌,4℃保存。完整培養液在使用前加入10%熱滅活的胎牛血清。

傳代:用吸液管吹洗細胞使其懸浮,或用手從側面拍打細胞培養瓶(當用大細胞培養瓶時)重懸細胞。當用來接種的細胞重懸前就有很多細胞漂浮,要吸掉漂浮細胞及舊培養液,加入新培養液重懸細胞。按合適比例傳代細胞到新培養器皿中。(以1:5或更多為宜,每2-3天傳代一次)28℃培養(不用CO2培養箱)

凍存:95%培養液+5%DMSO凍存於液氮。


以上為培養基和血清常規使用種類和比例,僅供參考。

其中:

BME : Basal Medium Eagle

DMEM: Dulbecco’s Modified Eagle Medium

FBS: Fetal Bovine Serum

IMDM: Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium

MEM: Minimum Essential Medium

NEAA: Non-Essential Amino Acids Solution

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