生物醫學是實驗科學，需要通過實驗來進行分子表達檢測、表型檢測和機制驗證，以實驗證明理論正確性。
然而，想要做好基礎實驗並不是一件容易的事，需要研究人員花費大量時間和精力在實驗室，重複實驗操作，才能輸出實驗成果。
解螺旋為大家整理出14個基礎實驗詳盡教程！裡面不僅包含了實操步驟，並且貼心總結了實驗過程中常見問題及對策，比如：
WB實驗中出現不好看的條帶
1. 不好看的條帶大多是因為蛋白酶降解，造成條帶出現在奇怪的位置。建議使用已經保存在冰上的新鮮樣品或換抗體。
2. 如果蛋白質位置比較高，重新加熱樣本可以幫助打破蛋白質的結構。
3. 模糊的條帶經常是因為轉染過程中電壓過高或氣泡，應確保凝膠在較低的電壓下運行，以及轉染的三明治避免產生氣泡。另外，換新的電泳緩衝液 可能也可以幫助解決問題。
4. 條帶不平滑，可能是由於阻力低導致穿過蛋白質凝膠的速度過快，因此要選用質量較好的樣品。
5. 白色條帶是由於蛋白質或抗體太多了。
qPCR 擴增曲線不穩定
可能原因：RNA 純度低；體系中存在較多雜質；儀器使用時間過長。
解決方案：
1) 提取高純度的 RNA，小心操作；
2) 對儀器進行校準。
IHC邊緣效應
可能原因：組織邊緣貼附不牢，邊緣組織鬆脫漂浮於液體中；試劑未充分覆蓋組織。
解決方案：
APES/多聚賴氨酸處理玻片；組織切片儘量薄；儘量避免選用壞死較多的組織；滴加試劑時讓試劑完全覆蓋組織。
……
解螺旋帶大家從PCR、WB等基礎實驗原理到基因過表達、RNAi等基因表達實操，從實驗試劑推薦到疑難雜症的解析，最後結合文獻信息，學習相關實驗技能！（劃到底部立即領~）
目錄↓↓↓
一、7個基因表達檢測實驗
包含7個基因表達檢測詳盡教程，如rtPCR、PCR引物設計、RNA抽提、RT-qPCR、WB實驗、IHC實驗、免疫組化圖像分析。
每個實驗都詳細介紹了樣品製備、操作要點、數據分析……
1
rtPCR
rtPCR 技術可以分解為：RNA 抽提、反轉錄、PCR、PCR 產物檢測。
2
PCR 引物設計
PCR，相信我們都不陌生，是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法，即通過試管中進行的DNA複製反應，使極少量的基因組DNA 或RNA樣品中特定基因片段在短短几小時內擴增上百萬倍。
3
RNA抽提
RNA抽提有很多種方法，其中TRIzol法是最流行的。
TRIzol法很快速，且能抽提多種屬總RNA，對少量的組織和細胞以及大量的組織和細胞都能有效分離，能抽提不同分子量大小的多種RNA，避免DNA和蛋白的污染，抽提出來的RNA適用於多種實驗。
4
RT-qPCR
以cDNA為模板進行PCR，在PCR擴增過程中，通過收集螢光信號，對PCR進程進行實時檢測。由於在PCR擴增的指數時期，模板的Ct 值和該模板的起始拷貝數存在線性關係，所以可以定量。
5
WB實驗
蛋白免疫印跡（Western Blotting）是將電泳分離後的蛋白質從凝膠轉移到NC膜或PVDF膜上，然後用特異 性抗體檢測某特定蛋白的一種蛋白質檢測技術。
6
IHC實驗
免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC）利用抗原與抗體特異性結合的原理，使用抗體去標記組 織細胞內的蛋白質，然後通過化學反應使抗體顯色來確定組織細胞內的蛋白質的位置和表達量。
7
免疫組化圖像分析
使用軟體Image-Pro Plus 6（IPP6）分析單張免疫組化圖像、多張免疫組化圖像以及批量分析免疫組化圖像，包括校正圖片、選定測量項目、選定測量範圍、測量、輸出數據等詳細步驟。
二、7個基因表達操作實驗
1
過表達
基因過表達操作流程為構建基因過表達載體——轉染——檢測過表達效果。
2
融合基因表達
構建融合基因克隆的重點在引物設計，而引物設計要點在——不能移碼！不能中間就終止！
3
長片段/突變基因表達
長片段/突變基因克隆的重點在引物設計和 PCR。
4
RNAi
RNAi 技術的重點在 siRNA 設計，siRNA 設計優先使用文獻中或預設計siRNA庫中已經驗證過的siRNA靶點，實驗時同時使用多個有效靶點以排除脫靶效應，既可以直接使用siRNA片段，也可以使用shRNA來進行RNA干擾。
5
miRNA 靶序列尋找
microRNA（miRNA）是一類長度在 22nt 左右的小 RNA 分子，它並不編碼 蛋白質，因此 miRNA 與 siRNA 和 circRNA 等小 RNA 分子一樣，也是一種非編 碼 RNA。
6
miRNA QPCR 檢測
在做qPCR的過程中，常常會出現各種問題，讓初學者一籌莫展，要debug，首先要明白bug是怎麼出現的，才能對症下藥。
7
流式檢測細胞周期
PI法是經典的周期檢測方法，PI為插入性核酸螢光染料，能選擇性地嵌入 DNA雙鏈螺旋的鹼基之間與之結合，其結合的量與DNA的含量成正比例關係，用流式細胞儀進行分析，就可以得到細胞周期各個階段的DNA分布狀態，從而計算出各個期的百分含量。
三、讀文獻學實驗
身邊很多小夥伴剛開始讀實驗類文獻的時候都是這樣的：
1.讀標題：這什麼鬼，看不懂
2.讀概述：emmm我好像大概應該明白了
3.拉到下面，掃了一眼：WOC怎麼這麼多圖！這都是什麼鬼？這個&*（…%是什麼？這個#￥%@^又是什麼?
4.還是其他文章更適合我
不知道屏幕前的你，是不是也是這樣呢？
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