THP-1分化為巨噬細胞

巨噬細胞是重要的免疫效應細胞，在固有免疫和適應性免疫應答中發揮重要作用。同時，它也是高度異質性的細胞，受局部微環境的影響，可活化為不同的類型，展現出不同的表型和功能。由於巨噬細胞在不同的組織環境和生理、病理條件下的異質性，巨噬細胞被分為兩種主要類型：M1型巨噬細胞和M2型巨噬細胞。

THP-1細胞通常用佛波酯（PMA）誘導分化為巨噬細胞，然後在PMA仍然存在的情況下：

脂多糖(LPS)(100ng/mL)、IFN-γ(20ng/mL)培養48h，誘導其向M1極化；

IL-4(20ng/mL)、IL-13(20ng/mL)培養48h，誘導其向M2極化；

最後，在無刺激物和無PMA的情況下，用無血清RPMI-1640培養基重懸細胞，可保持72h[2]。

PMA誘導THP-1步驟：

將處於對數生長期的THP-1細胞離心，用RPMI-1640培養基重選；

加入PMA，顯微鏡下細胞計數，調整THP-1細胞密度為5*10^5/mL；

使PMA終濃度為100ng/mL，將細胞種入六孔板，每孔加入細胞2mL；

48h後，顯微鏡下觀察巨噬細胞構建成功。

單核細胞THP-1用PMA誘導後，由懸浮式生長變成貼壁生長，由圓形變成不規則形態，體積進一步增大，細胞漿疏鬆，細胞核增大明顯，可見大量明顯細胞器，胞膜周圍可見少量突起[3]。

THP-1分化為泡沫細胞

THP-1細胞誘導分化為巨噬細胞後，可以通過攝取大量脂質轉變為泡沫細胞，這也是動脈粥樣硬化產生的原因。

將THP-1細胞經PMA誘導為巨噬細胞後，可用RPMI-1640培養基配製氧化修飾低密度脂蛋白OX-LDL，使其終濃度為80mg/L，加入六孔板中，每孔量為2mL，干預24h。

油紅O染色步驟：

• 吸出各孔中培養基，PBS漂洗三次；
• 4%多聚甲醛37℃固定30min；
• PBS漂洗兩次，油紅O（1mL/孔）37℃染色20-30min；
• 60%異丙醇漂洗5s，最好不要超過10s；
• 馬上用PBS漂洗2-3次。

單核細胞源性巨噬細胞用OX-LDL誘導24h後, 倒置顯微鏡下觀察，巨噬細胞體積進一步增大，細胞膜突觸形成明顯，胞漿增加，疏鬆化，可見大量細胞器及吞噬的脂質小滴。油紅O染色後，細胞漿內可見大量紅染物質[4]。

參考文獻：

[1] 郭強, 陰海鵬, 李翠玲, 等. 誘導THP-1細胞分化為M1和M2型巨噬細胞的鑑定[C].第九屆全國免疫學學術大會論文集. 2014.

[2] Serena T , Federica D M , Jieun K , et al. Convenience versus Biological Significance: Are PMA-Differentiated THP-1 Cells a Reliable Substitute for Blood-Derived Macrophages When Studying in Vitro Polarization?[J]. Frontiers in Pharmacology, 2018, 9:71-.

[3，4] 王庸晉, 王治平, 石變華,等. IL-1對單核細胞向泡沫細胞誘導分化過程中ACAT-1mRNA表達的影響[J]. 長治醫學院學報, 2008, 22(6):4.