乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、異戊酸等廣泛地存在於自然界中，它們的共同特點是具有較強的揮發性，生物學上一般稱之為揮發性脂肪酸（VFA），今天我們來看看如何通過比色法測定植物中的揮發性脂肪酸。

一、試劑

所有試劑除註明者外，均為分析純。

1.1 硫酸（1:1）：濃硫酸加到相同體積的水中配製成稀硫酸。

1.2 酸性乙二醇：取30.0ml乙二酸與4.0ml配製的稀硫酸混合。

1.3 4.5mol/LNaOH：稱取18.0gNaOH溶於水中，冷卻後定容至100ml。

1.4 10%鹽酸羥胺溶液：稱取10.0g鹽酸羥胺溶於100ml蒸餾水中。

1.5 羥胺試劑：量取40ml 4.5mol/L NaOH與10ml 10%鹽酸羥胺混合。

1.6 酸性氯化鐵試劑：稱取20.0g氯化鐵（FeCl3.6H2O)溶於500ml水中，準確加入20ml濃硫酸，並稀釋至1L。

1.7 乙酸標準液：精確稱乙酸(分析純)1.0050g，稀釋至100ml，此標準液含乙酸10mg/mL。

二、主要儀器

萬分之一分析天平、分光光度計、水浴鍋

三、試樣的製備

將沼液樣品以4000-10000r/min的離心條件下離心，得澄清的樣品試液，備用。

四、分析步驟

4.1 標準曲線繪製

準確吸取10mg/mL乙酸標準液1.0ml、5.0ml、10.0ml、15.0ml、20.0ml、25.0ml、30.0ml分別置於100ml容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度線，搖勻，即得100ug/ml、500ug/ml、1000ug/ml、1500ug/ml、2000ug/ml、2500ug/ml、3000ug/ml的乙酸標準系列液。

分別吸取0.5ml乙酸標準系列液置於試管中，準確加入1.7ml酸性乙二醇試劑，充分混合，置於沸水浴中加熱3min，.然後取出並置於冷水中冷卻，加入2.5ml鹽酸羥胺試劑，混勻，放置1min，然後每個管中加入10ml酸性氯化鐵試劑，用水定容至25ml，混勻靜置5min，用分光光度計在500nm下測吸光度。

4.2 揮發性脂肪酸含量測定

吸取0.5ml於試管中，應用的試劑和操作步驟同4.1。

4.3 空白溶液製備

吸取0.5ml蒸餾水，應用的試劑和操作步驟同4.1

4.4 若濃度較高，可進行稀釋後再測定。

五、結果計算

揮發性脂肪酸含量（mg/L）=（C×V×1000）/N

式中：

C--為從校準曲線或回歸方程求得的揮發酸的含量，mg；

V--為測量液體積，ml；

N--為稀釋倍數；

1000--為換算因數。

來源：栢暉生物整理